(原创)单胞藻培养相关事项

虾苗企业的生存主要取决于虾苗培育的效果。虾苗的成活率直接影响产业链的上下游。单细胞藻类是虾早期最适合的饵料。如果栽培得当,不仅可以节约成本,减轻苗圃水体的环境负荷,还可以为虾类的发展奠定坚实的基础,提高成活率。根据一个人育苗的经验,喂养单细胞藻类和不喂养它们之间还是有一些区别的。例如,幼苗的变态时间缩短,幼苗的活力和大小较大,水质优于不饲喂单细胞藻类的幼苗。当然,如果培养不当,也会产生不良影响,如向藻类溶液中添加超过标准的有害细菌、藻类老化、过度喂养等。因此,只有合理应用才能获得理想的效果。限于个人层面,我敦促你纠正描述方法的缺点。

单细胞藻类纯培养室操作说明

仪器使用

(1)洁净工作台

提前打开,使用前打开紫外线灯和鼓风机开关20分钟;超净桌面上不存放不必要的物品,以保持工作区域的净化气流不受干扰,避免工作时气流受到明显干扰。超净桌子保持光滑,易于用酒精消毒布擦拭。水平是在倒入培养基时使培养皿中的板厚一致。工作时,超净工作台周围的空气应缓慢流动,并尽可能减少杂菌的数量。因此,种子保藏室应定期清洗消毒,门窗紧闭,尽量减少杂菌的数量。空气过滤网定期清洗。

(2)真空泵、溶剂过滤器和过滤膜

这一过滤环节只是为单细胞藻类纯培养室(种子保存、净化和扩管)准备干净的无菌海水。其他级别的培训不需要这个链接。

滤膜的孔径为0.2微米,不能用手握住。用镊子选择它。真空泵通过适当直径的橡胶管与溶剂过滤器紧密连接。每次过滤时应注意过滤膜的过滤效果,防止过滤孔堵塞影响过滤效果。过滤瓶中的滤液不能离开滤板的出水口,否则会被吸入真空泵,损坏真空泵;

在滤板中的营养液被完全过滤(没有水滴)之前,泵不能停止。应定期注意真空泵中的油量和注油量。

(3)恒温鼓风干燥箱

设定温度。首先,按下温度控制器功能键SET进入温度设置状态。此时,速度设置显示屏闪烁。按下换档位置键与加键或减键配合。在设置过程中,首先从百分位号设置到百分位号。设置完成后,按功能键设置。此时,干燥箱进入加热状态,加热指示灯亮起。当烤箱中的温度接近设定温度时,加热指示灯闪烁几次,以控制进入恒温状态。使用注意事项:物品不应堆得太满,出风口不应堵塞,以免影响均匀升温;如果有牛皮纸和塑料包装,温度不应超过180度。取出物品时,盒子内外的温差不应太高,以免玻璃器皿破裂。橡胶制品不能放进去。

(4)加湿器

与生化培养箱一起使用。

水源是蒸馏水;加湿器不应随容器中的水一起移动。加水时的注意事项应在容器上注明,直到水位满为止:

平时注意水箱中储存的水量,及时补充,远离热源和腐蚀性物质。

(5)当蒸汽灭菌器

容器装满水时,水位必须超过电热管,最好是低水位

首先,关闭排水阀,打开进水阀。只有当溢出的水皮管有水流出时,才能接通电源。此时,进水阀可以暂时关闭。当蒸馏水从出口皮管流出时,打开进水阀准备蒸馏水。定期清洗蒸馏器内壁,清除水垢,否则会影响蒸馏水的质量和使用效果。不要关闭水阀准备蒸馏水,否则电热管会烧坏。

(6)鼓风机

定期更换吸入口的过滤棉。如有异常情况,请电工检查

(7)空调种子保藏室是否有藻类生长,保持恒温,否则关闭。一级和二级空调根据外部空气温度调节开关。

2卫生消毒

1过滤筒过滤器。筒式过滤器滤芯应更换一次,用过的滤芯应浸泡在1%盐酸溶液中消毒12小时以上。然后用洗涤剂清洗,用足够的水冲洗,干燥备用。(滤芯规格应小于或等于0.5微米)。

1过滤筒过滤器。筒式过滤器滤芯应更换一次,用过的滤芯应浸泡在1%盐酸溶液中消毒12小时以上。然后用洗涤剂清洗,用足够的水冲洗,干燥备用。(滤芯规格应小于或等于0.5微米)。

2个试管(规格:10毫升至20毫升)、锥形瓶(50毫升至200毫升)、500毫升锥形瓶、2.5升广口瓶、移液管、移液管/盒、玻璃管、胶水管、气体结石、溶剂过滤器、培养皿。使用后,用清水清洗,用1%盐酸浸泡12小时以上(浸泡时,除溶剂过滤器外,大小相近的容器放入不同类别的不同消毒桶中,规格差异较大,容易造成碰撞和破碎)。然后用洗涤剂清洗(用刷子清洗试管底部时,不要用力太大,否则底部容易开裂)。然后应该用大量清水清洗,风干或晒干。高压灭菌后,应将其放入恒温干燥箱(橡胶管和气石除外)中干燥。

3聚乙烯袋用于二级藻种的挂袋培养或三级膨胀培养(一般使用约12升藻液)。用清水冲洗内外,用1%盐酸浸泡12小时以上,然后用大量清水冲洗,晾干或晒干备用。由于海藻袋是近似密封的,因此在防止微生物污染方面具有良好的效果。

4毛巾种子保藏室、一级毛巾和二级毛巾不得混用,所有使用的毛巾应消毒、清洗、干燥后备用。

5锡纸应重复使用

6牛皮纸,定期在烘箱中干燥,除非它被油污或污垢粘住并损坏。

7定期更换空气过滤器的滤芯(用于1级和2级培养物的进气口过滤)。过滤元件已经被涂油或分散并丢弃。

8定期更换鼓风机进气口处的过滤棉

9对于新购买的器具,首先清除包装上的污垢,用洗涤剂擦洗,用自来水冲洗,用1%盐酸浸泡12小时以清除游离碱性物质,用清水冲洗,晾干或晾干备用。

室内卫生和消毒

1种子保藏室每天早上用清水擦洗实验桌面、地板、墙壁和木质框架。消毒后,打开紫外线灯20分钟。这时,关掉空调和荧光灯。由于紫外线灯照射会产生一定量的臭氧,对人体有害,所以消毒后关掉紫外线灯,人们应该间隔一段时间再进入。进入种子保藏室换鞋。

2每天清洗一次和二次房间,接种前后用消毒剂对载体架进行消毒。

3消毒药水(高锰酸钾)

4常用消毒剂浓度1%盐酸、20ppm次氯酸钠(有效氯)、碘溶液(1000ppm)、70-75%酒精、1毫克/升高锰酸钾。

三种接种

藻类固体培养基制备

应清洗烧杯和玻璃棒,锥形瓶和培养皿应消毒、清洗、灭菌和干燥。将称量的纯化琼脂粉加入烧杯中,加入一定量的海水,加热(必须保持搅拌以防止琼脂糊底部燃烧)直至完全熔化。加热的琼脂培养基应透明,无明显沉淀。如果显而易见,可以使用干净的白色薄法兰绒或夹有一薄层脱脂棉的双层纱布在漏斗上涂抹,趁热过滤。熔化后,准确加入营养盐(培养基高压灭菌并冷却至50摄氏度以下后,必须加入维生素B溶液)。培养基可用121℃高压蒸汽灭菌20-30分钟。灭菌后,立即取出培养基,冷却至50℃以下,即加入维生素B溶液。将锥形瓶和装有培养基的培养皿放在超净的工作台上,点亮酒精灯,用右手托起锥形瓶底部,在酒精灯上轻轻烧一下瓶口,然后将培养基快速倒入培养皿中,直到皿底部被盖住(厚度适中)。放置后,放置20-30分钟,待培养基凝固后开始操作。如果制成斜面培养基,加入维生素B溶液后,将装有培养基的锥形瓶和试管以及厚度约1 cm的小木板放在超净工作台上。子包装约为试管高度的1/3-2/3(取决于具体情况)。子包装数量应为底层的2/3和斜面的1/3。将它放在适当的斜面上,直到它自然凝固。准备好培养基后,应丢弃任何裂纹、水浸和异常颜色。

固化后立即进行操作。现在普遍采用平板标记接种和涂层接种。

平板划线接种

接种环在酒精灯火焰上完全烧红后,接种手柄在旋转的同时在火焰中缓慢来回传递三次。藻种只能在冷却至室温后才能采摘(为了保证藻种不被烫伤,采摘前接种环可与培养皿内壁或培养基接触),接种环可快速接种到新的培养基中(划线可采用斜线法、网格法、曲线法、辐射法等。)。用左手拿住盘子,用拇指和食指轻轻抬起锅盖,同时靠近火焰。用右手握住接种环,并将其伸入盘中。在板上的一个区域画一条线(根据方法不同,动作也不同)。划线时,使接种环以30-40度的角度与平板表面轻轻接触,并用腕力在表面上快速滑动(注意不要切割平板表面或伸入培养基中)。接种环拾取种子后和标记后拔出时,不要触摸盘子的壁/口,也不要触摸其他物体和桌面。接种后,接种环从手柄部分到环的末端逐渐用酒精灯火焰灭菌,环不会直接燃烧,防止接种环上残留的藻类或菌体飞溅污染空间。上述操作完成后,用无菌密封膜密封培养皿的开口(膜必须用酒精消毒,用紫外线灯消毒,使用前风干)。密封时,用左手拇指按压薄膜一侧的末端,用右手拇指和食指握住另一侧的末端,并快速在培养皿的开口周围打圈并密封。用于“包衣和接种”的种子液只能在弧菌检验合格后使用。涂布杆在火焰上缓慢来回移动3次,冷却(不急冷),用移液管枪从试管中吸取种子液并注射到平板上(枪筒不应接触试管外壁,也不应接触其他物体或桌面),用涂布杆来回快速涂布表面,使藻液均匀分布,完成后用平板密封标记。

补充:试管液体培养基接种

种子液体

重新包装后,给所有试管接种疫苗。移液枪用于选择移液量(试管口灭菌)并注入新的培养基。桶不得接触管子的外壁,也不得接触其他物品或台面。一桶只能用于同一种液体。在试管中选择另一种液体时,必须更换枪头。接种后,选择合适的光照温度进行培养。由于试管培养是静态培养,在静态条件下,藻类细胞会聚集在试管底部,并通过藻类细胞周围的营养物质形成屏障。营养摄入受阻,光吸收不均匀。为了使营养摄入正常,藻类细胞受光均匀,有必要定期摇动试管(先用手喷雾灭菌酒精,手腕用力摇动,不要摆动手臂,不要上下摇动)

三角瓶,500毫升烧瓶,2.5升烧瓶液体培养基接种

三角瓶接种需要无菌操作。在室内卫生条件下接种500毫升瓶和2.5升瓶液体培养基。三种瓶子、所需营养液、锡箔、移液管、洗耳球、气管和陨石在使用前应消毒、清洗和灭菌。三角烧瓶应定期摇动,500毫升和2.5升烧瓶在通风条件下培养。

将二级聚乙烯藻袋液体培养基接种到

气管中。陨石在使用前必须消毒和清洗。藻类提取管最后一次使用后,应通过水泵向管内注入消毒盐酸溶液。这次使用前,应在使用前用海水或淡水清洗。所选种子液应无明显沉淀、泡沫、原生动物、附着物,颜色正常,藻细胞密度高,形态正常,弧菌检测合格后方可选择。海水漂白水消毒的有效氯为10ppm,曝气12小时,检测余氯,使用前加硫代硫酸钠中和。如果使用稀释漂白剂,应在制备当天使用,而未使用的漂白剂应在24小时后丢弃。稀释的漂白剂必须密封并储存在避光的容器中。由于漂白水会随着时间逐渐分解,一次性漂白水不应过多,也不应储存过多,以免影响杀菌效果。

1,2,3级藻类提取标志:

试管→三角瓶→500毫升瓶→2500毫升瓶→ 20升藻类聚乙烯袋→ 18升藻类培养或藻类培养池膨胀聚乙烯袋